一、三種檢測方法的含義
  1、核酸檢測
    核酸檢測的是病原體的遺傳物質，如DNA或RNA，如果檢測結果為陽性，說明病原體的遺傳物質存在于患者體內，患者正處于感染期，可直接確診為感染病例；
  2、抗體檢測
    抗體檢測的是患者體內免疫系統為應對新冠病毒感染而產生的抗體，如果檢測結果為陽性，說明患者體內存在針對新冠病毒的抗體，患者正處于感染期或已經康復，可作為輔助手段幫助確診感染；
  3、抗原檢測
    抗原檢測的是病原體的組成蛋白，如果檢測結果為陽性，說明患者體內含有病原體的組成成分，患者正處于感染期，可直接確認為感染病例。

  二、三種檢測方法的窗口期有所區別：
  病原體感染后遺傳物質迅速擴增，在發病早期即可被檢測到；
  隨后病原體抗原蛋白大量表達，在患者體內的含量快速達到峰值；
  而在發病后的7-14天內，患者體內免疫系統開始先后產生應對病原體的IgM和IgG抗體，其中IgM會在較短時間內消失，而IgG會長時間存在于患者體內。（圖1）。

圖1. 新冠病毒檢測方法的窗口期示意圖

      三、三種檢測方法的檢測原理

  但你知道他們的檢測原理是什么？樣本類型有哪些？檢驗又是一個怎么樣的流程以及存在哪些問題 ？今天，給大家科普一下~~

  （一）新型冠狀病毒核酸檢測
  核酸檢測具有早期診斷、靈敏度和特異性高等特點，是確診新冠肺炎的“金標準”，目前使用最廣泛的是實時熒光定量RT-PCR技術。一般檢測位于病毒ORF1ab和N基因上的兩個靶標，同一份標本需滿足雙靶標陽性或重復檢測為單靶標陽性或兩種標本同時滿足單靶標才能確認SARS-CoV-2病毒核酸陽性。

  1、核酸檢測試劑盒原理？

  以病毒獨特的基因序列為檢測靶標，通過PCR擴增，使我們選擇的這段靶標DNA序列指數級增加，每一個擴增出來的DNA序列，都可與我們預先加入的一段熒光標記探針結合，產生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，累積的熒光信號就越強。而沒有病毒的樣本中，由于沒有靶基因擴增，因此就檢測不到熒光信號增強。所以，核酸檢測其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。

  2、核酸檢測樣本類型有哪些？

  一般為鼻拭子、咽拭子、鼻咽拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

  3、五個步驟檢測新型冠狀病毒

  檢測程序需要經過五個步驟，取樣、留樣、保存、核酸提取、上機檢測，這需要嚴謹的科學實驗才能完成。
  （1）用咽拭子擦拭咽后壁及雙側咽扁桃體處各5-10次，且不斷旋轉拭子；
  （2）需要醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋；
  （3）保存，將樣本管放入密封袋中及時送檢，而送檢過程中需要嚴格的運輸環境，2-8攝氏度保存。
  （4）操作核酸提取，將滅活病毒后的樣本進行核酸提取，用于后續檢測，可以采用自動化的設備，如核酸提取儀等。
  （5）熒光PCR核酸檢測，也就是上機器檢測，將提取物進行熒光PCR擴增反應，需要70—80分鐘。

  4、核酸檢測存在哪些問題？
  （1）假陰性，由于采樣不當、標本保存不當、采用不同類型的標本以及使用不同廠家試劑都可能造成核酸檢測結果“假陰性”而出現漏診；
  （2）對檢測設備或平臺要求較高，高靈敏度的RT-PCR儀價格不菲，對實驗室的潔凈度和操作人員要求也較高；
  （3）核酸檢測耗時較長，完成一個RT-PCR的檢測通常需要4-6個小時，然而考慮到樣本運輸、大量樣本積壓的情況，通常最快24小時才可以報告結果。
  因此當核酸檢測陰性時，將IgM和IgG抗體檢測增加進去，可以彌補核酸檢測容易造成漏診的缺點。

  （二）新型冠狀病毒血清抗體檢測
  新型冠狀病毒肺炎發病7天后，血清特異性抗體逐漸產生，首先出現的是免疫球蛋白IgM抗體，然后出現IgG抗體。因此，IgM抗體增高提示近期急性感染，IgG抗體增高提示既往感染。
  血清學檢測最大的優勢在于方便快捷，檢測時間較短，能夠有效突破現有檢測技術對人員、場所的限制，縮短檢測用時，被寫進了《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》。如果疑似病例血清特異性IgM和IgG抗體陽性，IgG抗體由陰性轉為陽性或恢復期較急性期有4倍及以上升高，則可以診斷其感染了新冠病毒。

  1、血清抗體檢測試劑盒原理？

  采用膠體金免疫技術，在結合墊處噴涂膠體金標記的重組新型冠狀病毒抗原和質控抗體金標記物；NC膜上包被兩條檢測線（G線和M線）和一條質控線（C線）。M線包被有鼠抗人IgM單抗，G線包被有鼠抗抗人IgG單抗，C線包被有質控抗體。樣本加到加樣孔中，該樣本在層析作用下將沿檢測卡向前移動，如果樣本中含有新冠狀病毒IgM抗體，則該抗體與膠體金標記病毒抗原結合，形成夾心復合物，將會呈現陽性結果。如果樣本中含有新型冠狀病毒IgG抗體，則該抗體會與膠體金標記新型冠狀病毒抗原結合，形成夾心復合物，將會呈現陽性結果。該檢測卡還包含一條質控線（C線），用于判斷層析過程是否順利。

  2、血清抗體檢測樣本類型有哪些？

  一般為血液，包括血清、血漿和全血。

  3、三個步驟檢測新型冠狀病毒

  （1）打開檢測卡鋁箔袋，將檢測卡取出并水平放置于桌面上；
  （2）用移液器吸取血清/血漿/全血樣本加到加樣處，再用同樣的方法吸取緩沖液滴加至檢測卡加樣孔中。
  （3）等待15分鐘，判讀結果。

  4、血清抗體檢測存在哪些問題？

  （1）假陽性，個別患者血液中含有類風濕因子、異嗜性抗體、自身抗體，以及藥物和腫瘤細胞等，易造成試驗的交叉反應，故偶現假陽性的結果；
  （2）假陰性，由于血清抗體檢測方法存在一定的窗口期以及檢測試劑盒的靈敏度不同會出現假陰性結果。
  因此血清抗體檢測僅用作對新冠病毒核酸檢測陰性疑似病例的補充檢測，不能單獨作為診斷指標用于篩查。聯合使用血清抗體檢測與核酸檢測，有助于提高疾病的檢出率，盡可能地找出確診患者，更有利于疫情的控制。
  核酸與IgG、IgM抗體聯合檢測的結果解讀

  （三）新型冠狀病毒抗原檢測

  新型冠狀病毒抗原檢測可直接檢測出人體樣本中是否含有新型冠狀病毒，診斷快速、準確、對設備和人員要求低，采用雙抗夾心法，使用兩種抗原特異性抗體去識別和結合一個靶點抗原的不同表位，則可以大大降低交叉反應的幾率，從而有效提高其特異性。

  1、抗原檢測試劑盒原理？

  新型冠狀病毒的N蛋白、E蛋白和S蛋白等抗原，可作為免疫原，在病毒感染人體后，刺激漿細胞產生特異性抗體。依據雙抗夾心ELISA原理，樣本滴加在樣本墊上，通過液相層析依次通過結合墊，NC膜上的檢測線（T線）和質控線（C線）。結合墊內含有標記的抗原特異性抗體，可以與樣本中的抗原（病毒蛋白）發生結合，當液流到達檢測線（T線）時，固定在這條線上的第二種抗原特異性抗體再次與抗原結合，將會呈現陽性結果。質控線（C線）包被IgG抗體，可以結合樣本墊中抗體，用于判斷層析過程是否順利。

  2、抗原檢測樣本類型有哪些？

  一般為感染部位的樣本，例如口咽拭子、鼻咽拭子、痰液、血清、血漿等。

  3、四個步驟檢測新型冠狀病毒

  （1）將標本處理液滴至標本處理管中；
  （2）將取樣拭子攪拌并擠壓管壁，使標本充分洗脫至處理液中；
  （3）取出檢測卡，向圓孔中加樣；
  （4）等待15分鐘，判讀結果。

  4、抗原檢測存在哪些問題？

  （1）假陰性，抗原檢測需要更高的敏感性，由于新型冠狀病毒主要侵犯肺泡等下呼吸道，所以從鼻咽、口咽等上呼吸道取樣，不一定能取到病原體，或者取樣中所含病毒數量較少，這些因素都可造成漏檢；
  （2）制備工藝繁瑣耗時，研發抗原試劑盒需要先將重組抗原制備出來，再打到小鼠體內制備單克隆抗體，約需要兩三個月，如果制備出的抗體性能不好還需要重新制備，又需要兩三個月。

  四、聯合檢測

  新型冠狀病毒核酸/抗體/抗原檢測各有側重，不能相互替代，多種檢測方法聯合應用，互為補充，將分子生物和免疫水平檢測相結合，發揮各自優勢，提高靈敏性與特異性，可有效縮短檢測窗口期，提高陽性檢出率，為各種可能的風險人群提供雙重保障。